Shroomok logo К началу

Инокуляция

Материал из Shroomok | Выращиваем псилоцибиновые грибы
Чат в телеграме Shroomok Telegram чат
Подпишись на наши каналы Shroomok YouTube канал Shroomok Telegram канал

< Назад
Вперед >️
📖
1.Вступление
2.Что купить для выращивания псилоцибиновых грибов
3.Готовим споровую взвесь
4.Выбор субстрата
5.Приготовление субстрата
6.Подготовка ёмкостей для субстрата
7.Стерилизация
👉Инокуляция
9.Собираем инкубатор своими руками
10.Кейсинг
11.Колд-шок
12.Собираем парник, выставляем кейки
13.Старт плодоношения псилоцибиновых грибов
14.Снятие споровых отпечатков
15.1 волна плодоношения
16.Сушка и хранение урожая
17.Регидрация кейков
18.2 волна плодоношения
19.3 волна плодоношения
20.4 волна плодоношения
21.5 волна плодоношения
22.6 волна плодоношения
23.Утилизация кейков
24.Собираем статистику гровинга
25.Эксперименты в процессе гровинга
26.Итоги гровинга
27.Оверлей, аборты и продукты жизнедеятельности грибницы
28.Кулинария. Готовим конфеты с псилоцибами
29.Капсулы для микродозинга
30.Микродозинг. Основные правила
31.Жидкий мицелий vs Споровая взвесь
32.Легальный статус
33.Психоделический трип: подготовка, меры предосторожности
34.Бэд-трип: как уберечься
35.Отвар из псилоцибиновых грибов

ШАГ 6. День 2. Инокуляция

На этом этапе ты уже сделал ряд подготовительных работ и у тебя должны быть готовы:

Теперь можешь смело приступать к инокуляции.


Что такое инокуляция?

Инокуляция (от лат. inoculatio — прививка) — введение живых микроорганизмов в питательную среду, почву, организм животного или растения (то же, что "посев" в лабораторной практике и "заражение" — в сельском хозяйстве, медицине, биологическом эксперименте). В нашем случае, это введение спор в стерильный зерновой субстрат при помощи жидкой споровой взвеси.

Какие есть методы инокуляции?

  • Жидкая споровая взвесь. Это не самый быстрый метод с точки зрения зарождения мицелия в субстрате. Однако это самый простой и самый быстрый способ старта гровинга для начинающего грибника. Именно этим методом мы воспользуемся в этом разделе. Отметим, что приготовление жидкой споровой взвеси это базовый навык культиватора, который понадобится и для других методов инокуляции.
  • Жидкая культура (жидкий мицелий или жидкая грибница). Составляющими для приготовления являются жидкая споровая взвесь и питательная среда (например, на основе раствора мёда), в которой начнет своё развитие мицелий. Жидкая грибница обладает более высокой жизнеспособностью, чем споровая взвесь. Из нее можно приготовить много сырья, размножив её в питательных растворах. Процесс колонизации субстрата при инокуляции жидкой культурой стартует на несколько дней быстрее и развивается активнее. Но процесс приготовления жидкой грибницы более трудоёмкий и требует времени для развития мицелия в жидкой питательной среде.
  • Кусочком зернового субстрата, обросшим мицелием (трансфер зерна). Этот метод требует идеальной стерильности. Процесс колонизации зерна быстрый и активный. Но для реализации этого метода уже должен быть в наличии субстрат обросший мицелием.
  • Кусочком агара, обросшим мицелием. Для этого нужно предварительно подготовить питательную стерильную среду на основе картофельного агара с мальтозой или декстрозой и сперва инокулировать её. Картофельный агар с декстрозой — наиболее широко используемая среда для выращивания грибов и бактерий.


Инокуляция такой питательной среды осуществляться непосредственно спорами из спорового отпечатка, жидкой культурой, путем переноса агара с мицелием в новую чашу Петри с агаром или путём клонирования плодового тела гриба.

С помощью агара можно выявить сегментацию разных типов роста мицелия (ризоморфный и войлочно-опушенный), осуществлять селекцию, улучшение штаммов и выделять новые штаммы из мультиспоры.

Такие процессы требуют идеальных стерильных условий, определенных навыков и понимания базовых микологических принципов. Все эти методы должен попробовать и освоить каждый уважающий себя гровер для выхода на новый уровень культивации грибов. Причем это касается не только псилоцибиновых грибов, но и деликатесных и медицинских грибов: кордицепс, ежовик гребенчатый, рейши, майтаке, агарикус и другие.

Это безумно интересная часть микологии!

Все эти методы будут продемонстрированы в дополнительных разделах руководства.

В текущем разделе мы разберемся с основным и самым простым методом для начинающих — инокуляция зернового субстрата жидкой споровой взвесью в шприце.


Видео "Инокуляция субстрата жидкой споровой взвесью c антибиотиком"

А теперь давай ознакомимся с деталями!


Что нужно для инокуляции? Перечень материалов

  1. Экипировка гровера: перчатки, медицинская шапочка, медицинская маска, медицинский халат (или полиэтиленовый дождевик).
  2. Стол, обработанный спиртом в чистой комнате. Ванная с плесенью на стенах, кухня, подвал, баня и т. п. не подойдут! Предпочти им обычную жилую комнату с плотно закрытыми окнами и дверями. В ней не должно быть сквозняков, кондиционирования и открытых вентиляционных каналов.
  3. Спирт в бутылке-спрей и во флаконе.
  4. Антибиотик (гентамицин или любой аналог) — 1 ампула.
  5. Нож для ампул или нож кухонный.
  6. Ватные диски.
  7. Банки со стерильным субстратом охлажденные до комнатной температуры .
  8. Стерильные дышащие бактерицидные пластыри — по 1 шт. на каждую банку.
  9. Жидкая споровая взвесь в шприце.
  10. Свеча, зажигалка или спиртовка.
  11. Маркер.


Зачем добавлять антибиотик в жидкую споровую взвесь перед инокуляцией?

Антибиотики (от др.-греч. ἀντί «против» + βίος «жизнь») — это противомикробные препараты, применяемые для лечения бактериальных инфекций. Они не действуют против вирусных и многих других инфекций. Антибиотики могут убивать микроорганизмы или останавливать их размножение, позволяя естественным защитным механизмам их устранять.

Антибиотик оказывает бактерицидное действие. Он активно проникает через клеточную мембрану бактерий и тем самым угнетает синтез белка возбудителя. Таким образом, если бактерии попали во взвесь вместе со спорами со спорового отпечатка, то их можно подавить на ранних стадиях при помощи антибиотика. Тем самым мы снизим риск развития бактериальной инфекции на этапе колонизации зернового субстрата.

Антибиотик добавляется за 20-30 минут до инокуляции. Передерживать взвесь с антибиотиком не рекомендуется. Ведь помимо того, что он воздействует на конкурирующие микроорганизмы он может радикально подействовать на споры псилоцибиновых грибов. Если же прошел час или два, ничего страшного — продолжай, нужные споры довольно живучи.

Но хотим тебя предупредить о том, что антибиотик может на несколько дней затормозить появление мицелия. Поэтому не беспокойся, если не увидишь зачатки мицелия на 4-6 день, он может появится к 10-14 дню.

Однажды у нас был вынужденный эксперимент и пришлось оставить антибиотик во взвеси на 3 часа. Это никак не повлияло на споры и скорость развития мицелия. Степень жизнеспособности спор во многом зависит от качества спор, условий и длительности их хранения. Детали и результаты в разделе Эксперименты в процессе гровинга


Можно ли обойтись без антибиотика?

Да, если для приготовления жидкой споровой взвеси ты использовал стерильный споровый отпечаток. В таком случае антибиотик можно не использовать.

Если уверенности в чистоте отпечатка нет, то антибиотик обязателен.

В итоге, у тебя есть 2 опции на выбор:

  1. Стерильный споровый отпечаток без использования антибиотика.
  2. Сомнительный споровый отпечаток с применением антибиотика.


Какой антибиотик использовать? Чем заменить?

Подойдет гентамицин. Форма выпуска — раствор для инъекций в виде гентамицина сульфата, 40мг/мл. Ампула 2 мл.

Антибиотик для споровой взвеси
Антибиотик для взвеси. Гентамицин. Раствор для инъекций в виде гентамицина сульфата, 40мг/мл. Ампула 2 мл.


В ряде стран антибиотики (в частности, гентамицин) отпускаются исключительно по рецепту. В таком случае подойдет раствор перекиси водорода (3%). Достаточно 1-1,5 мл на 20 мл жидкой споровой взвеси.

Также подойдет антибиотик-аналог, содержащий активные вещества со схожим механизмом действия и аналогичной формой выпуска (раствор для инъекций).

Часто тот же гентамицин или аналоги можно найти в зоомагазине или ветеринарной аптеке без рецепта!

Перечень подходящих антибиотиков:

  • Аминогликозиды - микацин, гентамицин, неомицин, стрептомицин, тобрамицин.
  • Тетрациклины - тетрациклин, лимециклин, доксициклин, тигециклин.
  • Азалиды - азитромицин.
  • Цефалоспорины - цефтриаксон.
  • Линкозамиды - клиндамицин, линкомицин.


Если у тебя стерильный споровый отпечаток, тогда ни антибиотик, ни перекись не нужны!


Подготовка к инокуляции и добавление антибиотика во взвесь

  1. Предварительно стоит помыть руки и умыться.
  2. Надень на себя экипировку: медицинскую маску, шапочку, медицинский халат (или полиэтиленовый дождевик).
  3. Обработай спиртом руки в перчатках. Тщательно втирай спирт по всей поверхности перчаток. Обработай спиртом рукава до локтя и всю поверхность стола.
  4. Обработай спиртом все, что находится у тебя на столе: банки с зерном, ампулу с антибиотиком, нож, шприц со взвесью и даже флакон со спиртом. Спирт не жалей!
  5. Открой ножом ампулу с антибиотиком.
  6. Шприцем со взвесью втяни антибиотик из расчета: 1 мл антибиотика на 10 мл жидкой споровой взвеси. Измерять легко и удобно с помощью делений на шприце.
  7. Закрой колпачок шприца.
  8. Хорошенько взболтай взвесь, чтобы антибиотик распределился равномерно.
  9. Оставь шприц с антибиотиком на 20-30 минут. По истечении 20-30 минут можешь разбавить взвесь как это было описано в предыдущем разделе Споровая взвесь или сразу приступать к инокуляции.


Пошаговый процесс инокуляции


1️⃣ Обработай всё спиртом еще раз: руки, стол, шприцы, банки.

Подготовка к инокуляции
Подготовка к инокуляции жидкой споровой взвеси в стерильный зерновой субстрат

Удобно использовать спирт в бутылке-спрей. Можешь просто перелить имеющийся спирт в такую бутылку.

Этиловый спирт в бутылке-спрей
Этиловый спирт в бутылочке-спрей. Удобно использовать для дезинфекции во время микологических процедур


2️⃣ Поставь перед собой банку со стерильным субстратом. Сними с неё фольгу. Пластырь на крышке НЕ трогай и НЕ снимай!

3️⃣ Обработай спиртом банку с субстратом и инокуляционный порт на крышке.

4️⃣ Возьми шприц со взвесью и взболтай её, чтобы споры равномерно распределились в воде. Сними колпачок со шприца.

5️⃣ Зажги зажигалку или свечу. Кончик иглы шприца раскали над огнём до красноты.

Дезинфекция иглы над огнем перед инокуляцией
Дезинфекция иглы шприца со взвесью над огнем перед инокуляцией


Иглу шприца раскалить над пламенем до красноты
Иглу шприца раскалить над пламенем до красноты


6️⃣ Опусти иглу в спирт и/или протри иглу ватным диском, смоченным в спирте. Это делается не только дезинфекции, но и чтобы остудить иглу.

Опусти иглу шприца со споровой взвесью в спирт
Опусти иглу шприца со споровой взвесью в спирт


Подготовка к инокуляции. Протри иглу спиртом
Протри иглу шприца ватным диском смоченным в спирте


7️⃣ Введи иглу шприца в инокуляционный порт (сквозь пластырь). Влей взвесь (1-1,5 мл в каждую банку) по кругу банки для равномерного распределения по субстрату или по стенкам банки. Следи, чтобы кончик иглы НЕ касался зерна!

Инокуляция
Процесс инокуляции жидкой споровой взвеси psilocybe cubensis


8️⃣ Достань шприц из банки. Обработай иглу спиртом и надень защитный колпачек.

9️⃣ Место прокола (инокуляционный порт) заклей сверху внахлест еще одним дышащим бактерицидным пластырем. Если инокуляционный порт из бутилкаучука, то заклеивать пластырем не нужно.

🔟 Слегка потруси банку в одной плоскости, чтобы споры равномерно распределились по верхнему слою субстрата.

1️⃣1️⃣ Подпиши штамм грибов на банке, дату инокуляции, свои особые отметки, эксперименты.

🔥 Будь осторожен с огнем и спиртом. Соблюдай пожарную безопасность! 🔥

Повтори процедуру инокуляции с каждой последующей банкой с субстратом и споровой взвесью.

Перед каждой инокуляцией не забывай дезинфицировать иглу шприца спиртом и над огнем.

Процесс обработки иглы шприца над огнем можно пропустить. Это для дополнительной обработки, чтобы перестраховаться. Будет достаточно опустить иглу шприца в спирт или протереть ватным диском со спиртом перед каждой инокуляцией.

Теперь все чудо-банки после инокуляции нужно поместить в совсем темное, теплое (+27°..+29°C) и сухое место. Для этого понадобится организовать инкубатор. В нём мицелий будет наслаждаться своей вегетативной фазой и сожрёт всё на своём пути.

Переходим на следующий шаг —

ШАГ 7. День 3 - 14. Как сделать инкубатор. Проблемы на этапе колонизации ▶️

Остались вопросы? Есть что добавить? Пиши в комментариях ⬇️



< Назад
Вперед >️
📖
1.Вступление
2.Что купить для выращивания псилоцибиновых грибов
3.Готовим споровую взвесь
4.Выбор субстрата
5.Приготовление субстрата
6.Подготовка ёмкостей для субстрата
7.Стерилизация
👉Инокуляция
9.Собираем инкубатор своими руками
10.Кейсинг
11.Колд-шок
12.Собираем парник, выставляем кейки
13.Старт плодоношения псилоцибиновых грибов
14.Снятие споровых отпечатков
15.1 волна плодоношения
16.Сушка и хранение урожая
17.Регидрация кейков
18.2 волна плодоношения
19.3 волна плодоношения
20.4 волна плодоношения
21.5 волна плодоношения
22.6 волна плодоношения
23.Утилизация кейков
24.Собираем статистику гровинга
25.Эксперименты в процессе гровинга
26.Итоги гровинга
27.Оверлей, аборты и продукты жизнедеятельности грибницы
28.Кулинария. Готовим конфеты с псилоцибами
29.Капсулы для микродозинга
30.Микродозинг. Основные правила
31.Жидкий мицелий vs Споровая взвесь
32.Легальный статус
33.Психоделический трип: подготовка, меры предосторожности
34.Бэд-трип: как уберечься
35.Отвар из псилоцибиновых грибов

Чат в телеграме Shroomok Telegram чат
Подпишись на наши каналы Shroomok YouTube канал Shroomok Telegram канал

🍄 Купить споровые отпечатки